HIV PCR test. Principi upotrebe PCR dijagnostike za HIV

Posebnu pažnju zaslužuje PCR test na HIV. Zasnovan je na činjenici da pronalazi genetski materijal patogena. Ovo eliminiše grešku gotovo zagarantovano. Istorijski gledano, tehnika je planirana kao čisto naučna metoda, ali je našla primjenu.

Koliko vremena je potrebno za testiranje na HIV? ako sumnjate na infekciju? Razlika je upravo u efikasnosti, stoga se ovakva analiza najviše može propisati ranim fazama razvoj bolesti. Ako potencijalni pacijent odmah nakon moguće infekcije dođe liječniku, a još uvijek nema znakova virusa, tada će mu biti propisan PCR test. Djeluje od četvrtog dana prisutnosti viriona u krvi. Radi tačnosti, preporučuje se testiranje otprilike 14 dana nakon opasne interakcije.

Koja je pouzdanost HIV PCR-a nakon 2 sedmice?? Kako je utvrđeno, pouzdanost određivanja prisustva virusa metodom polimerazne lančane reakcije je vrlo upitna. Od 80-ih godina prošlog vijeka, ovaj poseban test se široko koristi i smatra se jednim od najpreciznijih koje je primio njegov programer Nobelova nagrada. Laureat je već u to doba predvideo obećanje polimerizacije.

Poreklo PCR analize

Datum rođenja se može navesti kao 1983. Metoda se temelji na izolaciji fragmenta stranog nukleotidnog lanca, to može biti ili ribonukleinska kiselina ili deoksiribonukleinska kiselina, umjetno se razmnožava i proučava. Specijalista za PCR uzima HIV DNK i umnožava je prema principu komplementarnosti, stvarajući prilično dug lanac koji je pogodan za ispitivanje i testiranje. HIV RNA PCR se radi na isti način, samo se uzima plazma ili serum.

Pojava ovog pristupa u širokoj praksi bila je pravi iskorak i omogućila je veliki korak u pružanju pomoći pacijentima. Tako je postalo moguće pomoći ljudima u najranijim fazama, da otkriju bolest i prije pojave specifičnih antitijela. Od ovog dana u istoriji medicine, HIV više nije smrtna kazna.

HIV dijagnoza PCR

Da biste proučavali metodom lančane reakcije polimeraze, potrebno je uzeti vrlo malo infektivnog materijala, tako da se dijagnoza može postaviti brzo i odmah.

HIV dijagnoza PCR tačan, zahtijeva virtuozan nivo kvalifikacija radnika koji se bave istraživanjem. Moderni laboratorijski objekti provjeravaju podatke koje dobiju mnogo puta prije nego što prijave rezultat.

Dijagnoza HIV infekcije metodom PCR metoda traje jedan dan ili nekoliko, sve zavisi od obima posla.

Postoje neki poželjni uslovi da ispitanik dobije najistinitiji odgovor:

• Nemojte jesti 8-10 sati, osim ako nema kontraindikacija;
• Odustanite od alkohola za nekoliko dana;
• Ne praktikujte sportske vežbe dan ranije.

Ovo je sve što subjekt treba da uradi. Ostalo je na zdravstvenim radnicima. Sterilnost u prostoriji mora biti 100% Referentne laboratorije vodećih centara se redovno provjeravaju kako bi se osigurala čistoća i upotrebljivost sterilizatora. PCR se koristi i za potvrdu dijagnoze i za brojanje virusnih čestica u krvi, odnosno virusnog opterećenja.

Koliko brzo mogu da uradim PCR test na HIV?

Mnogi još uvijek ne vjeruju rezultatima koji se dobiju prvih dana nakon kontakta s patogenom. HIV PCR test nakon kojeg vremena se smatra najoptimalnijim? Što više vremena prođe od trenutka kada virus uđe u tijelo, lakše ga je prepoznati. Ali ne treba zaboraviti da je s vremenom sve teže liječiti pacijenta. Ako se pouzdano zna da je došlo do kontakta sa bolesnom osobom, onda ne treba čekati više od 14 dana. Ako nema informacija o kontaktima sa pozitivnim HIV ljudi, onda test treba uraditi odmah kada se pojave prvi simptomi.

HIV PCR u 9 sedmici ima visoku tačnost, ali u ovom trenutku može biti ponuđen drugi test, ELISA. Ova alternativna analiza je jeftinija i takođe tačna, ali se zasniva na proučavanju antitela, koja se, nažalost, ne pojavljuju odmah nakon infekcije. U idealnom slučaju, da bi se potvrdila dijagnoza, oba testa se rade, a vrijeme određuje ljekar.

Kvalitativni PCR za HIV daje razumijevanje da li je virus imunodeficijencije zaista prisutan u tijelu. Ista metoda može otkriti i druge infekcije.

Kako se vrši testiranje na HIV pomoću PCR?

Analiza uključena HIV metoda PCR postupak nije kompliciran i počinje uzimanjem venske krvi od pacijenta. Mogu se ispitati i DNK i RNK, ali će procedura uzimanja materijala biti ista.

Korištenjem posebnih reagensa i prajmera, analiza se provodi u sterilnoj laboratoriji. U jedinici vremena, broj kopija raste do određenih vrijednosti, te vrijednosti procjenjuje zaposlenik laboratorija. Da bi se to utvrdilo, vrši se i određivanje patogena mi pričamo o tome o istom virusu. Dakle, metoda omogućava kvalitativno i kvantitativno proučavanje biomaterijala.

Pod kojim uslovima je dijagnoza HIV infekcije PCR metodom obavezna?

S obzirom da analiza nije jeftina, ne radi se na svima i ne uvijek. Istina, postoji niz slučajeva kada je to obavezno. Donatori, na primjer, moraju napraviti HIV PCR test. Analiza se vrši i u slučaju nepredviđenih nezgoda u medicinske ustanove i laboratorije, a istovremeno postoji opasnost od kontakta zdravih osoba sa krvlju zaraženih osoba.

U većini slučajeva istraživanje se provodi na dobrovoljnoj osnovi. Oni mogu samo da obavežu medicinski radnici a ponekad i nastavnici i drugi obrazovni radnici koji imaju kontakt sa malom djecom. Također, znakovi oštrog pada imuniteta mogu poslužiti kao osnova za obavezni pregled.

Rezultati PCR analize na HIV i njihova tačnost i pouzdanost

Pouzdanost HIV PCR testa pokazuje veoma visok, do 99%. Treba podsjetiti da tačnost zavisi i od roka. Petog dana nakon što virus uđe u organizam, tačnost je približno 80%. Do 14. dana ova brojka raste na 98%. Zatim se penje na 99%.

Praksa pokazuje da lažno negativnih rezultata praktički nema; HIV PCR je 99% tačan dobra emisija o zdravstvenom stanju osobe koja je bila u kontaktu sa HIV pozitivnim osobama.

HIV PCR analiza u ranoj fazi daje priliku da se brzo odgovori na problem i preduzme pravovremene mjere za proširenje aktivan život. Bilo bi dobro da se pregledate ako postoji rizik od infekcije.

HIV PCR negativan, šta to znači?

HIV PCR negativan, kao što je gore pomenuto, praktično ne može biti lažno. U takvim situacijama doktor postavlja dijagnozu „zdravo“ i dalji pregled nije indiciran, osim ako se, naravno, s vremenom ne pojave klinički simptomi bolesti.

Šta učiniti ako je rezultat HIV PCR testa pozitivan?

Potpuno drugačija situacija je kada PCR test na HIV daje pozitivan rezultat. U ovom slučaju možete računati na grešku, ali da biste potvrdili ovu hipotezu, potrebno je nastaviti ispitivanje. Potrebno je izvršiti ponovljeni test i dalje istraživanje drugim metodama, a liječnik će svakako propisati pretrage. Zahtjevi ljekara se ne mogu zanemariti.

PCR za HIV provodi se u ranim fazama, a ponekad se propisuje i kada je pacijent na antiretrovirusnoj terapiji.

Izgledi za PCR test

PCR metoda u dijagnostičkoj medicini može se smatrati obećavajućom, efikasnom i tačnom. Do sada se jedinim nedostatkom može smatrati visoka cijena. Proučavanje genetskog materijala virusne čestice omogućava vrlo precizno potvrđivanje ili opovrgavanje prisutnosti infekcije, kao i predviđanje brzine razvoja bolesti. DNK test za HIV, ili RNK analiza, daje tačnost do 99%, i to u vrlo ranim fazama. Rana dijagnoza HIV-a pruža velike šanse za uspješno liječenje.

Rezultat se procjenjuje nakon 14 dana od očekivanog trenutka ulaska virusa, pretpostavlja se da bi to mogao biti nezaštićeni seksualni kontakt ili ubrizgavanje iglom upitne čistoće. Negativan rezultat PCR analize može se smatrati pouzdanim, dok je pozitivan rezultat podložan dodatnoj provjeri.

*Ako nemate sreće i HIV PCR test pokaže pozitivan rezultat, ne očajavajte. Trenutno postoji čitava lista efikasnih antiretrovirusnih lijekova koji mogu usporiti napredovanje bolesti i produžiti život za 30-40 godina.

Metoda za liječenje bolesti uzrokovane virusom ljudske imunodeficijencije još nije pronađena. Ali dijagnostika je postigla ozbiljan uspjeh. Test na HIV koji se izvodi PCR metodom je jedna od opcija za otkrivanje virusa u tijelu.

Lančana reakcija polimeraze, ili PCR, jedna je od modernih metoda za dijagnosticiranje HIV-a. Zasniva se na sposobnosti nukleinskih kiselina da se same reproduciraju. Ćelija svakog živog organizma uključuje proteine ​​i nukleinske kiseline:

• RNA - ribonukleinska kiselina,
• DNK - deoksiribonukleinska kiselina.

Ove makromolekule pohranjuju genetski kod. Ako je koncentracija virusnih stanica u krvi niska, uzorak ne sadrži cijele lance DNK, već njihove pojedinačne „građevinske blokove“ - nukleotide. Lančana reakcija polimeraze otkriva čak i takve "fragmente" virusnih ćelija. Ovo vam omogućava da dobijete rezultat ranim fazama nakon moguće infekcije, kada se još nisu pojavili prvi klinički simptomi.

Najprecizniji rezultat može se dobiti korištenjem venske krvi za analizu. Par dana pre pregleda. Prestanite sa uzimanjem imunostimulirajućih lijekova 2 sedmice prije.

Uzorak biomaterijala se digestira u medicinskom laboratorijskom reaktoru. Frakcije se zatim tretiraju enzimima. Reagensi se kombinuju sa DNK virusnog molekula i dupliraju ga. Iz jedne ćelije dobijate 2, od 2 - 4, pa 8. Broj raste eksponencijalno. Lančana reakcija vam omogućava da brzo povećate količinu virusne komponente i učinite je vidljivom laboratorijskim tehničarima.

Norma je negativan rezultat testa, koji izgleda ovako: "Nije otkriven DNK virusa." Ovo je referentna (statistički prosjek) vrijednost.

Prednosti i nedostaci PCR tehnike za HIV

Dijagnostikovanje HIV-a pomoću PCR-a ima neosporne prednosti, ali ima i značajnih nedostataka. Prvi uključuju:

• Visoka tačnost. Vjerojatnost dobivanja lažno negativnih rezultata je izuzetno mala.
• Svestranost. Za istraživanje nije pogodna samo krv, već i druge biološke tekućine (vaginalni iscjedak, sperma). Koriste se i pljuvačka i urin, ali će tačnost rezultata biti manja. U ovim sredinama koncentracija virusnih ćelija je beznačajna.
• Širok spektar analiza. Jedan uzorak biomaterijala može se testirati na nekoliko bolesti.
• Brzina izvršenja. Lančana reakcija polimerazom je hitna dijagnostička metoda. Odgovor možete saznati već sljedeći dan.
• Pouzdanje je 80%. Koristeći PCR metodu, virusne čestice se mogu otkriti, čak i ako je njihova koncentracija niska. To vam omogućava da dijagnosticirate bolest u ranim fazama i započnete terapiju na vrijeme.
• Rana dijagnoza HIV infekcije. Vrijeme kada se HIV detektuje u krvi PCR-om je 10-14 dana nakon sumnje na infekciju. Ovo je standardna dužina za dijagnosticiranje virusa imunodeficijencije. u ovoj fazi još nisu otkriveni; ELISA metoda ne radi.
• Nema starosnih ograničenja. Ovo testiranje se može obaviti na djetetu od trenutka rođenja.

Nedostaci PCR metode u dijagnostici HIV-a:

• Veći trošak u odnosu na 3. generaciju enzimskog imunotesta.
• Zahtijeva sofisticiranu medicinsku opremu.
• Greška je 20% zbog visoke osjetljivosti reakcije. Kod autoimunih bolesti, malignih tumora i kroničnih infekcija, PCR može dati lažno pozitivan rezultat.

Kome je potreban PCR?

• Za preliminarnu dijagnozu potreban je rani odgovor. PCR pomaže potvrditi ili opovrgnuti rezultate ELISA.
• Imunobloting je dao pozitivan rezultat. Ako se prvo izvrši PCR analiza, onda je potvrda rezultata imunoblotingom obavezna. Istraživanja se međusobno nadopunjuju. Koristeći 2 metode odjednom, liječnici eliminiraju mogućnost grešaka.
• Kada se potvrdi pozitivan rezultat, PCR pomaže u praćenju efikasnosti terapije.
• Koristi se za testiranje krvi donatora na prisustvo.
• PCR se može izvesti čak i kod djece mlađe od godinu dana. Ova metoda se koristi za utvrđivanje HIV statusa novorođenčadi čije su majke nosioci virusa. Test obavljen u prvim danima života će pokazati da li je došlo do intrauterine infekcije. Do infekcije može doći dok beba prolazi kroz porođajni kanal. koje je beba stekla tokom porođaja može se identifikovati nakon 2 - 3 nedelje.

Koliko vremena je potrebno da se uradi PCR test i gdje ga mogu dobiti?

Izvođenje PCR testa na HIV i dešifriranje rezultata ne zahtijeva puno vremena. Uzimanje krvi traje 5-7 minuta. U standardnom slučaju, laboratorijskom tehničaru je potrebno samo 24 sata da pripremi sertifikat. Dijagnoza traje ne više od 8 sati, ostalo vrijeme je potrebno za registraciju. Pacijent prima izvještaj narednog radnog dana. izvršiti u roku od 2 sata.

Testovi na HIV se ne provode ovom metodom. polisa obaveznog zdravstvenog osiguranja. Ovu uslugu ne možete dobiti besplatno u javnoj klinici. Ali skoro sve komercijalne laboratorije obično imaju potrebnu opremu i reagensi. PCR testiranje je često uključeno u opšti skrining na HIV. Cijena složene dijagnostike kreće se od 600 do 1000 rubalja.

Proceduru možete obaviti anonimno. Na prijemu pacijentu se daje individualni broj po kojem će saznati rezultat. Moderni medicinski centri prikazuju sve podatke na svojoj web stranici u ličnom računu klijenta.

Zašto je HIV i AIDS toliko strašni, koje dijagnostičke metode postoje. Detaljne informacije o PCR studijama.

Prema statističkim podacima Svjetske zdravstvene organizacije zajedno sa UNAIDS-om, u proteklih četrdeset godina, više od 25 miliona pacijenata je umrlo od HIV-a i AIDS-a. Nije uzalud epidemiolozi HIV prozvali kugom 20. stoljeća, jer je šteta koju je ova infekcija nanijela čovječanstvu kolosalna. Zemlje koje su najviše pogođene zarazom bile su Afrički kontinent. Zaraza snažno pogađa ekonomije ionako nestabilnih država, a ljudi su siromašni.

Kada se pojave simptomi, hitna dijagnoza je izuzetno važna. infekcija organizma HIV infekcijom, jer pravovremeni tok terapije može spasiti ili barem povećati život pacijenta. Danas je tehnološki napredak prešao dug put: najnoviji načini dijagnoza virusa HIV-a i AIDS-a, tretman je dostupan svakoj osobi na planeti, pouzdanost testova karakteriše mali stepen greške, a terapija visokim procentom efikasnosti.

Dijagnoza HIV infekcije

U našoj zemlji je utvrđivanje prisustva HIV infekcije u tijelu pacijenta kompleks analiza:

• Enzimski imunotest
• Imuno blotting
• Lančana reakcija polimeraze
• Ekspresni testovi

Enzimski imunotest.

skrining (ELISA test) je početna faza određivanja infekcije u tijelu. Zasnovan je na proteinskim spojevima virusa nastalim u umjetnim uvjetima, koji identificiraju antitijela koja proizvode imune stanice kao reakciju na infekciju. Između reagensa dolazi do kemijske reakcije, zbog čega indikatorski element mijenja boju. To znači da je rezultat testa pozitivan. Informacije pomoću ove metode mogu se dobiti u roku od nekoliko sedmica od trenutka infekcije. Ova metoda ne otkriva prisutnost infekcije kod pacijenta, ali određuje antitijela proizvedena na ovu infekciju. Dešava se da proizvodnja antitijela počinje 10-15 dana nakon infekcije, ali u velikoj većini slučajeva kasnije - nakon 1-1,5 mjeseci.

Podaci o takvoj analizi se obrađuju od dva do deset dana.

Pouzdanost diangoze za HIV je podržana IB analizom. Izuzetno pozitivan IB test na virus može poslužiti kao uvjerljiv razlog za potvrdu infekcije.

Suština analize:

Uzima se uzorak venske krvi za analizu u laboratoriju. Uzorak se dodatno priprema, proteinska jedinjenja koja su prisutna u njemu se naelektrišu u ispitnoj komori, a zatim se raspoređuju u gel supstanci prema svojoj molekularnoj težini. Papirna traka obložena reagensom stavlja se nekoliko puta u pripremljeni uzorak. Ako u uzorku postoje antitijela na virus, dolazi do kemijske reakcije i linije postaju vidljive na test traci. Kada se pojave 2 ili 3 crtice p24, gp41 i gp120 ili gp160, rezultat testa je pozitivan.

Ako se dobije pozitivan rezultat IB analize, sa greškom od jedan posto, može se donijeti zaključak o prisutnosti HIV infekcije u organizmu.

Brzi testovi na HIV i AIDS

Najnovije tehnologije za određivanje virusa imunodeficijencije u tijelu su ekspresne metode. Informacije o takvoj analizi mogu se dobiti u roku od nekoliko minuta nakon završetka. Najveću pouzdanost imaju imunokromografski testovi - specijalne test trake na čiju površinu se raspršuje sloj reagensa. Antitijela sadržana u materijalu za ispitivanje dolaze u kontakt sa reagensom, mijenjajući boju indikatora. Nakon nekoliko minuta pojavljuju se dvije pruge koje ukazuju na prisutnost infekcije. Prisustvo jedne linije znači da nema infekcije.

Takav test se može koristiti kao dodatni podatak o takvom testu nužno je potvrđen od strane drugih studija.

Koliko košta brzi HIV test?

Ekspresni test na HIV koštat će u prosjeku 200-1000 rubalja.

Prema statistikama SZO, u proteklih 40 godina, 25 miliona ljudi je umrlo od side. Šteta uzrokovana ovom infekcijom je ogromna. Najviše zaraženih bilo je u afričkim zemljama, odakle je ova infekcija i nastala. Kod HIV-a, dijagnosticiranje bolesti postaje posebno važno. Istina, još nije stvoreno sredstvo za liječenje HIV-a, ali rana terapija može produžiti život pacijenta i poboljšati njegovu kvalitetu.

Dijagnoza HIV infekcije

HIV infekcija se utvrđuje u različitim fazama korištenjem sljedećih metoda:

• ELISA - enzimski imunotest.
• Western blot.
• PCR - lančana reakcija polimeraze.
• Ekspresni testovi.

PCR metodu je razvio američki biohemičar Kary Mullis, koji je za nju dobio Nobelovu nagradu 1983. godine. Danas se ova metoda u medicini za dijagnosticiranje svih infekcija smatra vodećom zbog svoje tačnosti i informativnosti. HIV nije izuzetak u ovom pogledu.

Suština analize

Svaka živa ćelija sadrži RNK i DNK. Ove nukleinske kiseline su sposobne za samokopiranje i samoreprodukciju. Svaka infekcija ima jedinstvene fragmente DNK. Ovi fragmenti nukleinske kiseline cirkulišu u biološkim tečnostima. Hvata ih i prepoznaje posebna oprema - reaktor. Ovo je osnova metode. Laborant prebrojava ove fragmente. Prati se RNA HIV retrovirusa. Čak i sa pojedinačnim kopijama virusnih čestica, PCR ih može otkriti i izbrojati.

Kao tečnost za ispitivanje najčešće se koristi venska krv. Posebne komponente metode stupaju u interakciju sa virusnim česticama i čine ih detektabilnim, jer se pronađeni fragmenti umnožavaju.

U slučaju Rezultat HIV-a Prisutnost virusa može se utvrditi mnogo prije nego što se pojavi klinika. Stoga, zbog svoje visoke osjetljivosti, PCR ima tako visoku dijagnostičku vrijednost. Velika prednost PCR-a je svestranost metode. Period inkubacije infekcije nije prepreka za PCR.

Cijena studije

PCR metoda je prilično skupa. Ovo je jedan od njegovih veliki minusi. Za njegovo izvođenje potrebna vam je najnovija oprema i visoko kvalifikovani laboratorijski doktor. Zbog navedenog, PCR dijagnostika se ne radi u malim naseljena područja. Možete se testirati samo u specijalizovanim velikim klinikama.

Troškovi određivanja HIV DNK u moskovskim klinikama kreću se od 2.800 rubalja, određivanje virusnog opterećenja pomoću PCR (virusne RNK u plazmi) - od 8.800 rubalja, a otpornosti HIV-a na inhibitore proteaze - od 16.500 rubalja. Kao što vidite, cijene su prilično visoke. PCR se može obaviti besplatno u javnim ambulantama u okviru polise obaveznog zdravstvenog osiguranja. Važno je da se postupak može obaviti anonimno. Na prijemu pacijent dobiva broj po kojem može saznati rezultat. Savremeni medicinski centri imaju lične račune klijenata u koje će se unositi ovi podaci.

Ciljevi studije

PCR dijagnostika za HIV propisuje se u sljedećim slučajevima:

• Otkrivanje infekcije kod djeteta rođenog od bolesne majke ili nosioca radi utvrđivanja intrauterine infekcije.
• Ako je ELISA dala upitne rezultate (HIV PCR pomaže u ovom slučaju da se postavi konačna dijagnoza).
• Identificirati kvantitativni sadržaj virusa u tijelu.
• Ako je imunobloting pozitivan, oni i PCR se međusobno nadopunjuju.
• Testiranje donatora.
• Za ranu dijagnozu HIV-a.
• Odrediti efikasnost i otpornost na ART.

Prednost ove analize je što se HIV PCR može uraditi čak i kod djece mlađe od godinu dana.

Studija se često provodi ne radi primarne dijagnoze, već tokom procesa liječenja. Primarna dijagnoza su serološki testovi (oni određuju nivo antitela na HIV). U slučaju lažno pozitivnog rezultata, ponavlja se - to može biti kada je virusno opterećenje nisko.

PCR dijagnosticira HIV kada još nema antitijela na njega. ELISA metoda u ovom slučaju neće dati odgovor.

I PCR test na HIV će već biti pozitivan. Ali simptomi ovog perioda HIV-a su nespecifični. Pacijent se prvo podvrgava dugotrajnom i neuspješnom liječenju ARVI kod liječnika opće prakse. Treba imati na umu da se dijagnoza HIV-a ne može postaviti samo na osnovu PCR-a, potrebno je podvrgnuti drugim sveobuhvatnim testovima. PCR metoda često služi kao pomoćna metoda za složeni slučajevi.

Priprema za analizu

Prije uzimanja PCR testa na HIV, 2 dana prije testa treba izbjegavati masnu hranu i alkohol. Takođe je bolje da se ne opterećujete psihički i fizički. Ako je pacijentu propisan kurs imunostimulacije, on se prekida 2 sedmice prije testa.

Krv je bolje davati ujutro. Također možete pregledati i druge biološke tekućine u tijelu (spermu, vaginalni sekret), ali najbolji materijal je krv. Pljuvačka, znoj, urin i suze se ne koriste, jer je sadržaj virusa u njima minimalan.

Prednosti PCR-a za HIV

Prednosti metode su izuzetno mala vjerovatnoća lažno pozitivnog rezultata, univerzalnost reakcije za sve biološke tekućine u tijelu. Analiza ima širok raspon:

• Jedno vađenje krvi može se koristiti za otkrivanje različitih infekcija.
• Tehnika je hitna, rezultat je gotov sutradan.
• Pouzdanost se kreće od 85 do 98%.
• Prisustvo HIV-a može se utvrditi 10-14 dana nakon infekcije (antitijela u ovom trenutku još nisu dostupna).
• Nema dobnih ograničenja, može se provesti odmah od trenutka rođenja.

Nedostaci metode

Nedostaci PCR-a su sljedeći:

• Skupoća analiza.
• Potrebna je sofisticirana medicinska oprema.
• Potrebni su visokokvalifikovani laboratorijski tehničar i doktor koji uzima analizu.
• Reakcija je vrlo osjetljiva, tako da greška može biti 20%.
• Lažno pozitivan rezultat može se pojaviti ako pacijent ima autoimune procese, onkologiju ili kronične infekcije.
• Neophodna je posebna čistoća laboratorijskih prostorija, jer virus može ući u analizu iz vazduha. Tada će rezultat biti netačan.

Za laboratorije u kojima se radi PCR, radi poboljšanja kvaliteta dijagnoze, razvijene su posebne stroge mjere prema sistemu SanPiN na adresi interna kontrola. Osim toga, moraju se poštovati sva pravila rada koristeći ovu tehniku:

• Morate se striktno pridržavati informacija na epruvetama.
• Prije uzimanja krvi ponovo pogledajte i uvjerite se da je test propisan.
• Medicinska sestra mora ispravno označiti epruvete.
• Laboratorijski doktor mora ispravno izvršiti sve manipulacije s biomaterijalom kako bi se spriječila unakrsna kontaminacija.
• Test sistem mora biti odličnog kvaliteta.

Samo ako su svi ovi uslovi ispunjeni, greška u odgovoru može biti samo oko 2% epizoda.

Trajanje analize

Mnoge ljude zanima koliko će vremena trebati da test za HIV bude spreman. Dijagnoza ne traje duže od 8 sati. Pacijent može dobiti odgovor već sljedećeg dana. Ekspresno testiranje se vrši u roku od 2 sata.

Pouzdanost PCR-a

Unatoč mnogim prednostima, PCR se ne smatra idealnom dijagnostičkom metodom. Ljudi mu se obraćaju ako je potrebno uraditi skrining testove na prisustvo HIV-a u organizmu.

Kada se uzima krv na analizu?

Koliko vremena je potrebno da se uradi PCR test na HIV? Pouzdan rezultat može se dobiti vađenjem krvi 4-4 dana nakon sumnje na infekciju. Nakon 2 sedmice, tačnost za HIV bit će 98%, a nakon 5 dana - 80%. Prisustvo PCR rezultata će biti pouzdano, ali za apsolutno tačan rezultat, takođe se radi ELISA.

ELISA test će biti efikasan samo ako postoje antitijela na virus ovo vrijeme može trajati od 1-3 mjeseca do šest mjeseci. Budući da ELISA daje veću vjerovatnoću (98%-99,9%), PCR se ne može nazvati 100% potvrdnim testom za prisustvo HIV infekcije. Ali ovo je jedina metoda u kojoj ne morate čekati da se pojave antitijela.

Za HIV, PCR metoda može pružiti informacije o efikasnosti ART-a, stadijumu HIV bolesti i količini VL (kvantitativna procjena prisustva HIV-a u tijelu). To će ukazati na ozbiljnost i obim promjena.

Takođe je neophodno uraditi PCR testove na HIV ako postoje antitela u krvi, ali njihovo prisustvo ne ukazuje na kliničku izvesnost HIV infekcije.

Testovi se ne rade samo u slučajevima infekcije i slučajnog seksualnog odnosa. Ostali razlozi:

• Planiranje trudnoće.
• Predstojeća operacija.
• Slučajni seksualni odnos.
• Neke profesije zahtijevaju da ovaj test bude dozvoljen za rad (nastavnici, ljekari i drugo medicinsko osoblje).
• Zatvorenici.
• TB pacijenti.
• Hitne službe i policijski radnici.
• Oni koji se vraćaju nakon odmora iz egzotičnih zemalja (po želji uvjerite se da nema infekcije).
• Prostitutke.
• Strani studenti.
• Narkomani.

Također, određeni simptomi kod pacijenta mogu vas natjerati da se testirate na HIV:

• Nagli gubitak težine.
• Dijareja koja traje duže od 3 sedmice.
• Nerazumno povećanje temperature duže vrijeme.
• Povećani limfni čvorovi.
• Neobjašnjivi uzrok upale pluća, kandidijaze itd.

Dešifriranje analize je prerogativ liječnika, a ne laboratorijskog asistenta.

PCR ili ELISA, što je bolje?

Kada se RNK virusa detektuje i kvalitativno i kvantitativno. Ovaj test jasno identifikuje specifičan patogen čak i kada postoji više patogena koji međusobno reaguju. Biološki materijal se može koristiti čak iu osušenom obliku. Loša strana je visoka osjetljivost PCR-a, kada lažno pozitivan rezultat može biti uzrokovan prisustvom čak i male količine stranog DNK na instrumentima ili epruveti.

Zadatak i mogućnost ELISA-e je utvrđivanje prisutnosti antitijela na retrovirus. Iako je njegova tačnost 99%, nije primjenjiv u ranim fazama.

Kvalitativni HIV test

Provođenjem visokokvalitetnog PCR-a na HIV utvrđuje se prisutnost virusa u tijelu. Rezultati će u ovom slučaju izgledati ovako: pozitivni, lažno pozitivni, negativni. Ali ovu studiju neće dati informacije o količini retrovirusa. Takva kvalitativna analiza je nepraktična kada je infekcija HIV-om već otkrivena u tijelu na drugi način.

Nemoguće je kontrolisati efikasnost liječenja visokokvalitetnim PCR-om.

Kvantitativni HIV test

Provodi se samo za osobe zaražene HIV-om kako bi se izbrojao broj kopija RNK virusa u biološkom proizvodu.

Svrha takve studije je praćenje liječenja i utvrđivanje otpornosti virusa na njega. Antivirusnu terapiju u takvim proračunima liječnik ne propisuje slijepo, pa će stoga biti efikasnija. Kvantitativni PCR za HIV infekciju se radi mnogo češće. Ova analiza se prikazuje u kopijama/ml krvi.

Koji rezultati se mogu dati:

• Virusne RNK nema ili je vrlo malo (oko 20 kopija/ml). Nema sigurnosti u dijagnozu.
• Od 20 do 10 do 6 stepeni kopija/ml - dijagnoza je pouzdana.
• Više od 10 do 6 kopija/ml - veliki VL.

Laboratorije mogu obavljati HIV PCR testiranje u realnom vremenu. To podrazumijeva posmatranje i numeričku procjenu akumulacije PCR proizvoda uz automatsko snimanje rezultata.

Opis

Lančanu reakciju polimeraze (PCR) izmislio je 1983. godine američki biohemičar Carey B. Mullis. Za ovo otkriće 1993. godine dobio je Nobelovu nagradu.

Danas su područja primjene PCR-a: savremena metoda molekularna biologija je izuzetno široka. PCR dijagnostika zauzima posebno mjesto u medicinskoj praksi. A razlog za to je prilično jednostavan: lančana reakcija polimeraze čini nemoguće mogućim.

PCR dijagnostika se često figurativno opisuje kao metoda kojom možete pronaći iglu u plastu sijena, a zatim napraviti plast sijena od ovih igala. "Igla" je mali komad genetskog materijala ćelije (DNK ili RNK).

Stoga je otkriće ove metode jedno od najvećih izvanredni događaji u oblasti molekularne biologije tokom proteklih decenija. Razvoj PCR metode je omogućio da se medicinska dijagnostika općenito podigne na kvalitativno novi nivo.

PCR osnove

Osnova metode je ponovljeno selektivno kopiranje (amplifikacija) određenog dijela DNK kako bi se dobila tolika količina genetskog materijala koja će biti dovoljna za vizualnu detekciju. U ovom slučaju, samo određeni dio DNK se kopira (amplifikuje) mnogo puta, pod uvjetom da je prisutan u biomaterijalu koji se proučava.

Osim toga, istraživanje, osim što jednostavno povećava broj kopija DNK dijelova, omogućava i druge manipulacije genetskim materijalom. Stoga se metoda široko koristi u naučna istraživanja, biološka i medicinska praksa: u dijagnostici zaraznih i nasljednih bolesti, u identifikaciji mutacija, genotipizaciji, utvrđivanju očinstva, ličnoj identifikaciji itd.

PCR u dijagnostici zaraznih bolesti

Danas je PCR dijagnostika infekcija jedna od najpreciznijih, najosjetljivijih i najefikasnijih kliničkih laboratorijskih metoda. Štaviše, raspon otkrivenih patogena je praktično neograničen - bio bi razvijen test sistem za PCR analizu željenog patogena.

Zbog svoje visoke osjetljivosti, PCR vam omogućava da identificirate patogen čak i s njegovim minimalnim sadržajem (to jest, samo nekoliko molekula njegove DNK prisutno je u biomaterijalu koji se proučava).

PCR otkriva uzročnike zaraznih bolesti kada se to ne može učiniti drugim metodama (imunološkim, kulturnim, mikroskopskim). Zbog toga je metoda polimerazne lančane reakcije postala „zlatni standard“ za niz infektivnih agensa, ona je vremenski testirana i klinički ispitana. U savremenoj laboratorijskoj dijagnostici zaraznih bolesti, PCR je najosjetljivija i najspecifičnija metoda za direktnu detekciju patogena. To omogućava ne samo utvrđivanje etiologije bolesti, već i praćenje tijeka infektivnog procesa i procjenu učinkovitosti liječenja.

Testiranje na SPI metodom PCR posebno je relevantno u asimptomatskom toku infektivnog procesa uzrokovanog bezuslovno patogenim mikroorganizmima (klamidija, kvalitativno određivanje DNK; mikoplazma, kvalitativno određivanje DNK; agens gonoreje, kvalitativno određivanje DNK; određivanje DNK trihomonijaze) . Na primjer, kod kronične gonoreje kod žena, čak i bakteriološkom metodom, često nije moguće identificirati gonokok, unatoč postojećim simptomima kroničnog upalnog procesa u cerviksu ili uretri.

Moderna PCR dijagnostika omogućava ne samo identifikaciju genetskog materijala infektivnih agenasa, već i određivanje njihove koncentracije DNK/RNA (kvantitativni format istraživanja). Određivanje broja patogena je važno u odlučivanju o liječenju, posebno ako se identifikuju oportunistički mikroorganizmi (mikoplazma, DNK kvantifikacija; Ureaplasma tipizacija, DNK kvantifikacija).

Jedan od glavnih pravaca u razvoju PCR metode je “Multiprime” format razvijen u CMD-u, koji omogućava otkrivanje više patogena u jednoj epruveti (i jednoj reakciji).

• Patogeni infekcija koje prenose iksodidni krpelji

PCR dijagnostika hepatitisa

Trenutno je poznato najmanje 5 virusa čija je sposobnost da izazovu oštećenje jetre dokazana. To su uzročnici hepatitisa A, B, C, D, E. U rijetkim slučajevima hepatitis mogu izazvati Epstein-Barr i herpes simplex virusi. Sposobnost agenasa kao što su virusi TT i hepatitisa G da inficiraju jetru danas ne prepoznaju svi. Svi ovi virusi pripadaju različitim porodicama, imaju različita biološka svojstva i, shodno tome, taktike liječenja će se također značajno razlikovati ovisno o etiologiji hepatitisa.

S obzirom na gore navedeno, veoma je stvarni problem je adekvatna etiološka dijagnoza virusnog hepatitisa uz identifikaciju specifičnog patogena. To je nemoguće bez upotrebe modernih molekularno bioloških metoda. Stoga je dijagnosticiranje hepatitisa metodom lančane reakcije polimeraze jedan od najvažnijih koraka u utvrđivanju uzroka bolesti i određivanju daljnje taktike liječenja.

PCR u dijagnostici HIV infekcije

Trenutno za laboratorijska dijagnostika HIV infekcija koristi najpristupačniji i istovremeno osjetljivi pristup - otkrivanje antitijela na HIV u krvi pomoću enzimskog imunosorbentnog testa (ELISA) - nakon čega slijedi potvrda pozitivnih rezultata analize pomoću imunoblotinga (IB). Efikasnost identifikacije osoba zaraženih HIV-om ovim pristupom može dostići 99% ili više.

Ali serološka dijagnoza HIV infekcije ima niz ograničenja:

1. Neefikasnost tokom perioda tzv “serološki prozor” (u prvim sedmicama nakon infekcije, antitijela se ne otkrivaju zbog njihovog odsustva ili niske koncentracije).
2. Antitela na HIV dugo vremena otkrivaju se kod sve djece rođene od majki zaraženih HIV-om.
3. Lažno pozitivni rezultati ELISA zbog prisustva u krvi antitela na antigene slične HIV antigenima.
4. Lažno negativni i upitni rezultati ELISA i imunoblotinga (posebno kod pacijenata u terminalnoj fazi bolesti).

Stoga se PCR testovi za skrining na HIV infekciju sada sve više koriste. Prema " Metodološke preporuke o provođenju pregleda na HIV infekciju" (odobreno od strane Ministarstva zdravlja i socijalnog razvoja Ruske Federacije 6. avgusta 2007.) "ako postoje epidemiološki kriterijumi koji ukazuju na nedavni rizik od infekcije HIV-om za pacijente i, istovremeno, vjerovatno lažno pozitivni ili lažno negativni rezultati u ELISA i IB, na primjer, kada se pregledaju djeca, rođena od majki zaraženih HIV-om, ili pacijenti u periodu „seronegativnog prozora“, koristi se PCR metoda kojom se otkriva HIV genski materijal ...” A u slučaju već utvrđene dijagnoze HIV infekcije, PCR analiza se koristi za prognozu, dinamičko posmatranje i praćenje terapije.

• Virus humane imunodeficijencije, kvalitativno određivanje DNK provirusa, PCR
• Kvantitativno određivanje RNK virusa humane imunodeficijencije, PCR
• Sveobuhvatna dijagnostika: kvalitativno određivanje RNK virusa hepatitisa C/DNK virusa hepatitisa B/virusa humane imunodeficijencije (HIV) RNK tipova 1 i 2

U Centru za molekularnu dijagnostiku (CMD) možete anonimno napraviti PCR test na HIV.